PRACTICA DE LABORATORIO - ENZIMAS DIGESTIVAS

PRACTICA DE LABORATORIO – ENZIMAS DIGESTIVAS

INTRODUCCIÓN

L as células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas necesarias para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan inmediatamente, y si no fuera por la participación de las enzimas, algunas reacciones no se producirían tan rápido.

Las enzimas, en su mayoría proteínas o RNA (riboenzimas), son catalizadores químicos que agilizan una reacción que envuelve la formación o rompimiento de enlaces químicos. Las enzimas no se consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razón por lo cual no se necesitan en grandes cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos formando un complejo enzima-sustrato; esto ocurre en un lugar en específico conocido como el sitio activo de la enzima. Las enzimas son muy selectivas porque pocas moléculas pueden interactuar bien con este sitio

En los ejercicios siguientes se estudiará el funcionamiento de la catalasa. Esta enzima está presente en casi todas las células aeróbicas y actúa descomponiendo peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) en agua y oxígeno, según la siguiente reacción: catalasa 2H2O2 2H2O + O2A.1. Funcionamiento de la enzima catalasa en varios organismos

A1. Funcionamiento de la catalasa en varios organismos

MATERIALES

• Peróxido de hidrógeno • Gasa (cheesecloth) • Papa • Placas de porcelana • Hígado • Goteros • Setas

• Morteros o licuadora • Espinaca

PROCEDIMIENTO

En este ejercicio se prepararán varios homogenados para obtener partículas pequeñas y uniformes al mezclarlas con el agua.

1. Para preparar los homogenados, corte en pedazos por separado las muestras de papa, hígado, setas y espinaca.

2. Usando una licuadora o mortero, muela el material con un poco de agua hasta diluir parte de la muestra; no muela excesivamente para que no queden pedazos muy pequeños del material.

3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa (cheesecloth).

4. Coloque cada homogenado en un tubo de ensayo.

5. Usando un gotero, coloque cinco gotas de cada homogenado en las fosas de la placa de porcelana y añada tres gotas de peróxido de hidrógeno. Observe y anote los resultados en la Tabla 5.1.

5. ¿Qué ocurrió al añadir el peróxido?

6. ¿Ocurrió lo mismo en todas las muestras?

7. ¿Por qué se forman burbujas?

8. ¿Qué otros organismos podrían usarse para esta prueba?

9. ¿Por qué se prepararon los homogenados? ¿Por qué no se añadió el peróxido directamente a los tejidos sin macerarlos?

10. Explique por qué la gran mayoría de las especies de plantas y de animales producen la enzima catalasa.

A2. ¿Se comporta de igual manera en todos los organismos?

MATERIALES

• Homogenado de hígado, papa, setas y • Peróxido de hidrógeno espinaca • Goteros • Tubos de ensayo grandes

PROCEDIMIENTO

1. Rotule cinco tubos de ensayo con las letras A a la E.

2. Ponga 3 mL de cada homogenado en los tubos como sigue:

A - Hígado B - Papa C - Setas D - Espinaca E - Agua

3. Marque el nivel hasta donde llega cada homogenado.

4. Ponga 3 mL de peróxido de hidrógeno en cada tubo de ensayo.

5. Observe la reacción que sucede en cada tubo y marque el cambio en el nivel del líquido.

6. Tabule los resultados en la Tabla 5.2.

¿Fue igual la producción de catalasa en todas las muestras?

¿Qué indican los resultados sobre la fisiología de estos organismos?

A3. Efecto de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas

MATERIALES

• Homogenado de hígado • Baño de agua • Termómetro • Agarradera de tubo • Hielo • Congelador

PROCEDIMIENTO

1. Rotule cinco tubos de ensayo del 1 al 5 y caliente un baño de agua hasta 37 °C y otro hasta 80°C.

2. Añada 5 mL de hígado homogenado a cada tubo.

3. Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas: Tubo 1 = 80 °C por 15 minutos Tubo 2 = 37 °C por 15 minutos Tubo 3 = Temperatura ambiental Tubo 4 = Hielo por 30 minutos Tubo 5 = Congelador a 4 °C por 30 minutos

4. Añada 2 mL de peróxido de hidrógeno al tubo 1.

5. Mida el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que se comienzan a producir burbujas, y anótelo en la Tabla 5.3.

6. Repita con los demás tubos.

7. Compare sus resultados en término de tiempo de reacción vs. temperatura.

¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?

¿Qué le sucede a las enzimas cuando se exponen a temperaturas extremas (muy frías o muy calientes?

INFORMACIÓN ADICIONAL • La catalasa: se encuentra en casi todas las células aeróbicas, donde acelera el rompimiento de peróxido de hidrógeno (producto tóxico de las células). A veces, la reducción de oxigeno al agua es incompleta y se produce “superóxido”, una sustancia sumamente tóxica. Una enzima rompe el “superóxido” y forma agua y peróxido de hidrógeno, que es menos tóxico. La catalasa entonces rompe el peróxido de hidrógeno para producir agua y oxígeno.

INTEGRANTES DEL GRUPO:

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GRADO:   ___________

***Nota: Deben entregar un informe de laboratorio 15 días después, que incluya las siguientes partes:

1.    Portada

2.    Introducción – marco teórico del tema visto

3.    Materiales y métodos

4.    Resultados (tablas, guía, gráficos si los hay)

5.    Análisis de resultados (solución de las preguntas)

6.    Conclusiones

7.    Bibliografía